Fosfórun virkjar meistaravaxtarjafnarann ​​DELLA í Arabidopsis með því að stuðla að tengingu históns H2A við krómatín.

DELLA prótein eru varðveitt meistaraprótein.vaxtastýringarsem gegna lykilhlutverki við að stjórna þróun plantna til að bregðast við innri og umhverfisvísum. DELLA virkar sem umritunarstýrikerfi og er ráðinn til að miða á verkefnisstjóra með því að bindast við umritunarþætti (TFs) og histón H2A í gegnum GRAS lénið sitt. Nýlegar rannsóknir hafa sýnt að stöðugleika DELLA er stjórnað eftir þýðingu með tvenns konar aðferðum: pólýúbíquitination framkölluð af jurtahormóninu gibberellíni, sem leiðir til hraðrar niðurbrots þess, og samtengingu lítilla ubiquitin-líkra breytiefna (SUMO) til að auka uppsöfnun þess. Að auki er virkni DELLA stjórnað af krafti með tveimur mismunandi glýkósýleringum: DELLA-TF milliverkunin er aukin með O-fúkósýleringu en hindrað með O-tengdu N-asetýlglúkósamíni (O-GlcNAc) breytingu. Hins vegar er hlutverk DELLA fosfórunar enn óljóst þar sem fyrri rannsóknir hafa sýnt misvísandi niðurstöður, allt frá þeim sem sýna að fosfórun stuðlar að eða dregur úr DELLA niðurbroti til annarra sem sýna að fosfórun hefur ekki áhrif á stöðugleika þess. Hér auðkennum við fosfórunarstaði í REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) hreinsað úr Arabidopsis thaliana með massagreiningu og sýna að fosfórun á tveimur RGA peptíðum á PolyS og PolyS/T svæðum stuðlar að H2A bindingu og aukinni RGA virkni. Samtök RGA með markvörsluaðilum. Sérstaklega hefur fosfórun ekki áhrif á RGA-TF milliverkanir eða RGA stöðugleika. Rannsókn okkar leiðir í ljós sameindaháttinn sem fosfórun veldur DELLA virkni.
Til að skýra hlutverk fosfórunar við að stjórna DELLA virkni er mikilvægt að bera kennsl á DELLA fosfórunarstaði in vivo og framkvæma hagnýtar greiningar í plöntum. Með sæknihreinsun á plöntuútdrætti og síðan MS/MS greiningu greindum við nokkur fosfósíð í RGA. Við aðstæður þar sem GA skortur eykst RHA fosfórun, en fosfórun hefur ekki áhrif á stöðugleika þess. Mikilvægt er að sam-IP og ChIP-qPCR mælingar leiddu í ljós að fosfórýlering á PolyS/T svæði RGA stuðlar að samspili þess við H2A og tengsl þess við markstýriefni, sem leiðir í ljós hvernig fosfórýlering framkallar RGA virkni.
RGA er ráðið til að miða við litning í gegnum samspil LHR1 undirlénsins við TF og binst síðan H2A í gegnum PolyS/T svæði þess og PFYRE undirlén og myndar H2A-RGA-TF flókið til að koma á stöðugleika í RGA. Fosfórun Pep 2 á PolyS/T svæðinu milli DELLA lénsins og GRAS lénsins með óþekktum kínasa eykur RGA-H2A bindingu. rgam2A stökkbreytta próteinið afnemur RGA fosfórun og tekur upp aðra próteingerð til að trufla H2A bindingu. Þetta leiðir til óstöðugleika á tímabundnum TF-rgam2A milliverkunum og aðskilnað rgam2A frá marklitningi. Þessi mynd sýnir aðeins RGA-miðlaða umritunarbælingu. Svipuðu mynstri væri hægt að lýsa fyrir RGA-miðlaða umritunarvirkjun, nema að H2A-RGA-TF flókið myndi stuðla að umritun markgena og affosfórun á rgam2A myndi draga úr umritun. Mynd breytt frá Huang o.fl.21.
Öll megindleg gögn voru tölfræðileg greind með Excel og marktækur munur var ákvarðaður með t prófi nemenda. Engar tölfræðilegar aðferðir voru notaðar til að ákvarða magn úrtaks til bráðabirgða. Engin gögn voru útilokuð frá greiningunni; tilraunin var ekki slembiraðað; rannsakendur voru ekki blindir á dreifingu gagna meðan á tilrauninni stóð og mat á niðurstöðum. Úrtaksstærðin er tilgreind í myndskýringunni og upprunagagnaskránni.
Fyrir frekari upplýsingar um hönnun rannsóknarinnar, sjá Natural Portfolio Report Abstract sem tengist þessari grein.
Próteinfræðigögn um fjöldarófsmælingar hafa verið lögð til ProteomeXchange samsteypunnar í gegnum PRIDE66 samstarfsgeymsluna með gagnagrunnsauðkenni PXD046004. Öll önnur gögn sem aflað er í þessari rannsókn eru kynnt í viðbótarupplýsingum, viðbótargagnaskrám og hrágagnaskrám. Upprunagögn eru veitt fyrir þessa grein.